眼庫操作技術(shù)指南
為規(guī)范眼庫操作技術(shù)，保障角膜質(zhì)量，制定本操作技術(shù)指南。
一、捐獻(xiàn)者評(píng)估
為保證眼庫獲取角膜材料的質(zhì)量，應(yīng)當(dāng)對(duì)捐獻(xiàn)者進(jìn)行嚴(yán)格的評(píng)估。
（一）捐獻(xiàn)者年齡。捐獻(xiàn)者年齡一般不小于2周歲。
（二）獲取時(shí)間。眼庫應(yīng)當(dāng)在捐獻(xiàn)者死亡6小時(shí)以內(nèi)獲取角膜。冬季可延長到12小時(shí)。
（三）捐獻(xiàn)者醫(yī)學(xué)資料。查閱并評(píng)估捐獻(xiàn)者醫(yī)學(xué)資料，包括捐獻(xiàn)者現(xiàn)病史、既往史、家族史、個(gè)人史、疾病診斷及死亡原因、各種化驗(yàn)報(bào)告及病理學(xué)報(bào)告、治療經(jīng)過及特殊用藥情況、眼部病史及檢查結(jié)果。
（四）捐獻(xiàn)者篩選。
1.絕對(duì)禁忌癥。捐獻(xiàn)者存在以下情況之一的，其角膜禁止用于角膜移植手術(shù)：
（l）死亡原因不明。
（2）傳染性和感染性疾病：急性病毒性肝炎，狂犬病，克雅?。–JD)、新變異型克雅?。╲CJD)或家族成員患克雅病，乙肝表面抗原（HBsAg）陽性，人類嗜T淋巴細(xì)胞白血病病毒（HTLV）Ⅰ型或Ⅱ型感染；丙型病毒性肝炎（HCV）血清學(xué)檢測(cè)陽性，人類免疫缺陷病毒（HIV）血清檢測(cè)陽性，亞急性硬化性全腦炎，進(jìn)行性多灶性腦白質(zhì)病，先天性風(fēng)疹，急性腦病合并內(nèi)臟脂肪變性綜合征，急性病毒性腦炎或不明原因的腦炎或進(jìn)行性腦病，急性敗血?。ňY、真菌血癥、病毒血癥），急性細(xì)菌性或真菌性心內(nèi)膜炎。
（3）惡性腫瘤：惡性腫瘤眼部轉(zhuǎn)移，急性白血病，急性播散性淋巴瘤。
（4）認(rèn)知障礙。
（5）眼局部疾?。貉鄄繍盒阅[瘤，眼球或眼內(nèi)急性感染，包括角膜炎、鞏膜炎、虹膜炎、葡萄膜炎、玻璃體炎、脈絡(luò)膜炎、視網(wǎng)膜炎等。
（6）凝血功能障礙：血友病以及曾接受過人源性濃縮凝血因子治療的其他凝血功能障礙。
（7）HIV高危人群。
2.相對(duì)禁忌癥。捐獻(xiàn)者存在以下眼部疾病之一的，綜合評(píng)估決定是否獲取角膜用于移植：
（1）影響移植成功率的眼病，如角膜中央斑痕、圓錐角膜和球形角膜等；
（2）翼狀胬肉或其他累及角膜植片中央光學(xué)區(qū)的結(jié)膜或角膜表面疾??；
（3）既往有內(nèi)眼或眼前節(jié)手術(shù)史：屈光性角膜手術(shù)，如放射狀角膜切開術(shù)、角膜鏡片層間鑲?cè)胄g(shù)、激光角膜切除術(shù)；眼前節(jié)手術(shù)，例如白內(nèi)障摘除術(shù)、人工晶體植入術(shù)和青光眼濾過手術(shù)；激光手術(shù)如氦激光小梁成形術(shù)、視網(wǎng)膜光凝術(shù)后等。
二、角膜獲取。
（一）獲取前的準(zhǔn)備工作。
1.初步檢查尸體情況，查閱并復(fù)印死亡證明、有關(guān)病歷、知情同意書等，辦理捐獻(xiàn)相關(guān)手續(xù)。
2.采集靜脈血6～8ml用于HIV、乙肝、丙肝、梅毒、血常規(guī)和血型檢測(cè)。
3.準(zhǔn)備手術(shù)器械包（眼球摘除包或角膜切除包）。
（二）全眼球摘除。
1.使用5%碘伏按照眼科手術(shù)要求范圍，消毒外眼皮膚三次；生理鹽水和新潔爾滅沖洗眼結(jié)膜囊各一次。
2.開瞼器開瞼；沿角膜緣剪開球結(jié)膜并向后分離；勾出內(nèi)直?。ɑ蛲庵奔。茔Q夾住止端，然后剪斷；用視神經(jīng)剪剪斷視神經(jīng)，拉出眼球剪斷各條肌肉；將眼球放入保存瓶，角膜向上（保存瓶底部置生理鹽水慶大霉素濕紗布），用記號(hào)筆在保存瓶上標(biāo)記眼別，放入保溫容器內(nèi)。
3.棉球填塞眶腔，裝入塑料或硅膠義眼片，整復(fù)上下眼瞼至瞼裂微閉狀態(tài)。
（三）原位角膜切除。
1.使用5%碘伏按照眼科手術(shù)要求范圍，消毒外眼皮膚三次；聚維酮碘沖洗結(jié)膜囊。
2.開瞼器開瞼；沿角膜緣剪開球結(jié)膜；用刀片自角膜緣向后輕刮，將筋膜組織刮向后，角膜緣后2～3mm處切開鞏膜，直達(dá)色素膜，但不能有眼內(nèi)容脫出；用角膜剪伸進(jìn)切口，360°剪開，用角膜鑷提起鞏膜緣，將色素膜輕輕分開；將切取獲得的角膜片（角膜組織和2～3mm寬鞏膜）放入有角膜保存液的保存瓶中，角膜片內(nèi)皮面向上；用記號(hào)筆在保存瓶上標(biāo)記眼別，放入保溫容器內(nèi)。
3.置塑料透明角膜片于眼表創(chuàng)面，調(diào)好位置，閉合眼瞼，恢復(fù)儀容。
三、角膜運(yùn)輸
角膜應(yīng)當(dāng)分別包裝并密封于保存液或濕房環(huán)境中，在冷藏條件下（2～8°C）運(yùn)輸。
四、角膜處理與保存
獲取的捐獻(xiàn)角膜應(yīng)當(dāng)盡快處理并選用最佳保存技術(shù)保存。
（一）眼庫實(shí)驗(yàn)室內(nèi)角膜切取。
1.操作場(chǎng)地。在眼庫超凈工作臺(tái)內(nèi)或潔凈手術(shù)室中。
2.器械準(zhǔn)備。無菌器械包，內(nèi)含治療巾一張，角膜剪一把、角膜鑷二把、刀片一個(gè)、彎盤一個(gè)、紗布、棉簽若干。
3.操作程序：
（1）1%碘伏浸泡眼球5分鐘（或1：2000慶大霉素浸泡15～20分鐘，1：5000升汞浸泡15～20分鐘）。
（2）超凈工作臺(tái)內(nèi)打開無菌器械包。
（3）無菌紗布環(huán)行包住眼球鞏膜部。
（4）用刀片全層切開角膜后2～3mm處鞏膜。
（5）角膜剪360°剪開，用鑷子取下帶鞏膜環(huán)的角膜（不含色素膜組織）。
（6）將角膜片放入有保存液的保存瓶中，密封后貼上標(biāo)簽，標(biāo)注角膜編號(hào)，保存日期和時(shí)間及保存方法。
（7）立即進(jìn)行角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度檢查并記錄。
（8）放入4℃恒溫冰箱保存?zhèn)溆谩?
（9）處理剩下的鞏膜。
（二）保存方法。角膜優(yōu)先進(jìn)行中期保存，特殊情況可進(jìn)行濕房保存，不能進(jìn)行新鮮保存（中期保存和濕房保存）的角膜可采用非活性保存方法，如干燥保存、冷凍保存等。
1.中期保存：將切取的角膜片置于含中期保存液的保存瓶中，4℃恒溫冰箱保存，具體保存時(shí)間根據(jù)選用的保存液使用說明。
2.濕房保存：將完整無菌捐獻(xiàn)眼球置于密閉保存瓶中，內(nèi)置鹽水紗布，角膜面向上，4℃恒溫冰箱保存，原則上48小時(shí)內(nèi)使用。
3.干燥保存：將切取的角膜片置于含干燥劑的保存瓶中，4℃恒溫冰箱保存，原則上可以長期保存，具體保存時(shí)間根據(jù)保存劑確定。
五、質(zhì)量評(píng)估
（一）大體檢查。主要包括以下內(nèi)容：
1.眼球的外形是否正常（如是否有前后葡萄腫）。
2.角膜是否有疤痕、劃傷、水腫。
3.眼壓是否正常，是否存在鞏膜破損。
（二）捐獻(xiàn)者傳染性疾病檢測(cè)。捐獻(xiàn)者HIV、HBsAg、HCV和梅毒血清學(xué)檢查結(jié)果應(yīng)當(dāng)均為陰性。
（三）裂隙燈顯微鏡檢查。
1.角膜上皮：是否有劃傷、干燥、點(diǎn)狀病變。
2.角膜基質(zhì)：是否有水腫、疤痕、角膜中央透明區(qū)直徑（老年環(huán)大小）。
3.角膜后彈力層：是否有皺折及皺折程度、內(nèi)皮細(xì)胞是否有血細(xì)胞附著等。
（四）全眼球角膜內(nèi)皮鏡檢查。使用非接觸角膜內(nèi)皮鏡檢查角膜內(nèi)皮，計(jì)數(shù)50個(gè)以上角膜內(nèi)皮細(xì)胞，并記錄檢查結(jié)果。
（五）保存角膜片的內(nèi)皮細(xì)胞學(xué)檢查。使用反射型角膜內(nèi)皮顯微鏡。角膜（內(nèi)皮面向上）放入保存液后立即使用反射型角膜內(nèi)皮顯微鏡檢查（從冰箱內(nèi)取出的角膜須復(fù)溫一小時(shí)后再檢查），計(jì)數(shù)三次取平均值，記錄檢查結(jié)果。
（六）角膜術(shù)前質(zhì)量評(píng)估。角膜使用前，應(yīng)當(dāng)再次進(jìn)行外觀檢查、裂隙燈顯微鏡檢查和角膜內(nèi)皮細(xì)胞學(xué)檢查，觀察保存液顏色和濁度是否有改變。
（七）不能用于全層角膜移植和角膜內(nèi)皮移植手術(shù)的角膜。
1.有相對(duì)禁忌癥的捐獻(xiàn)者角膜。
2.角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)小于2000個(gè)/mm2。
3.單純濕房保存超過48小時(shí)。
4.角膜中期保存液保存超過15天。
5.M-K液保存超過5天。
6.保存液顏色已有變化。
7.大于70歲的捐獻(xiàn)者角膜已保存10天以上。
（八）角膜數(shù)據(jù)記錄。眼庫應(yīng)當(dāng)將角膜的基本信息和各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)錄入中國人體角膜分配系統(tǒng)（以下簡稱分配系統(tǒng)）。尚未使用分配系統(tǒng)的眼庫，應(yīng)當(dāng)在本單位眼庫數(shù)據(jù)庫中記錄。
六、角膜分配
（一）核對(duì)角膜有關(guān)數(shù)據(jù)信息。在角膜分配前，應(yīng)當(dāng)核對(duì)捐獻(xiàn)角膜有關(guān)數(shù)據(jù)信息。
（二）啟動(dòng)角膜分配。眼庫應(yīng)當(dāng)使用分配系統(tǒng)分配捐獻(xiàn)角膜，執(zhí)行分配結(jié)果。尚未啟用分配系統(tǒng)的眼庫，按照人體捐獻(xiàn)角膜分配原則在其服務(wù)范圍內(nèi)科學(xué)公平分配角膜。
（三）角膜再分配。對(duì)于分配后未用于移植，退回眼庫的角膜，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格記錄其運(yùn)輸和保存的相關(guān)信息，并重新進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估。經(jīng)評(píng)估可以繼續(xù)用于移植的，眼庫應(yīng)當(dāng)再次分配。
（四）角膜召回。分配后發(fā)現(xiàn)角膜存在質(zhì)量問題或與移植受者匹配不佳的，眼庫應(yīng)當(dāng)及時(shí)召回，記錄相關(guān)信息。
七、眼庫感染控制與醫(yī)療廢物處理
眼庫應(yīng)當(dāng)根據(jù)國家相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章等，制訂眼庫醫(yī)院感染管理相關(guān)制度和安全操作制度。眼庫的醫(yī)療廢物處理應(yīng)當(dāng)按照《中華人民共和國傳染病防治法》《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》等有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。